背景：Etirinotecan pegol (EP)为一种独特的拓扑异构酶 1 抑制剂，可促进对 SN38 的持续接触。转移性乳腺癌 (mBC) 患者通过 EP 可获得 29% 的总缓解率，在此基础上又针对 mBC 患者进行了一项全球性临床 III 期 BEACON 试验。借助于患者血样中的循环肿瘤细胞 (CTC) 这一最低侵袭性的方式，可实现对与药物活性相关的药效学(PD) 标记物进行检测。本研究针对在治疗前后分离到的 CTC 建立了多元定量免疫荧光分析方法，从而实现了对与 EP 相关的靶点特异性 PD 标记物进行检测。

方法：通过对照组 (0.1% DMSO) 及给药组 (SN38, 10 uM) 肿瘤细胞系 (HCT116、 MCF7、 A549、SKBr3) 及健康供体的 PBMC，本研究建立了针对 Top1、Top2、g-H2Ax、Rad51、ABCG2 及 Ki-67 的分析方法。随后，在针对细胞角蛋白、CD45 及 DAPI 抗体标记的孔板上，对各生物标记物的最适抗体进行了多元分析，从而对 CTC 进行表型鉴定。在针对 BEACON 患者进行的分析中，抽取到的 7.5 mL 系列全血样本按 Apocell (德克萨斯州，休斯顿市)条件进行运输，以进行进一步处理。按 ApoStream 技术，对 PBMC 和 CTC 进行分离处理。对 CTC 进行 PD 标记物染色处理，并借助配备有图像分析软件的 iCys 激光扫描血细胞计数仪进行了分析。

结果：结合至肿瘤细胞的抗体表明，染色仅局限于细胞核区 (Top1、Top2、g-H2AX、Ki-67) 或细胞膜区(ABCG2)，根据峰距可实现对其同型对照物进行区分，相关信号强度与细胞标记物表达水平的高低情况有关。目前，约 80% 的 BEACON 患者同意参加 CTC 子研究。截至 2012 年 12 月，已获取到了 167 份 BEACON 患者给药前血样数据。99% 的血样已得到成功处理。93% 的样本可检测到 CTC，中位 CTC 数目为 216 个(范围：7.5-14816 个)。Top1、Top2、 g-H2Ax、Rad51、ABCG2 及 Ki-67 染色结果呈阳性的比例分别为 82%、 89%、16%、53%、 31% 及 52%。

结论：对于从参与 BEACON 试验的患者分离到的 CTC，可实现对 EP 靶点特异性药效生物标记物的有效测定。治疗前后样本的收集与分析工作仍在进行中。本研究临床试验信息：NCT01492101